產(chǎn)品類別：血小板的分離
 
產(chǎn)品編號：PLA2011D
 
產(chǎn)品名稱：狗外周血血小板分離液試劑盒
 
產(chǎn)品規(guī)格：200ml/KIT
 
產(chǎn)品價格：￥500.00元
 
本品用于分離狗外周血血小板


“XXXX”動物外周血血小板分離液實驗方法
 
技術(shù)文檔編號：TBD0049SOP
 
【產(chǎn)品規(guī)格】
 
200ml/Kit
 
【產(chǎn)品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：
 

	名稱	產(chǎn)品編號	規(guī)格
A	XXXX 動物外周血血小板分離液		200ml
B	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
C	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
D	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。
 
方法一：
 

• 在 15ml 離心管中，首先取抗凝血加于分離液之液面上（抗凝血與分離液最佳比例 1：2）， 250-300g ，離心 15min（注：根據(jù)血液樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為四層。第一層為血小板血漿層。第二層為環(huán)狀乳白色細胞層。第三層為透明分離液層。第四層為紅細胞層。

 

• 用吸管小心吸取第一層血小板血漿層到另一 15ml 離心管中，往所得離心管中加入同體積樣本稀釋液（產(chǎn)品編號：2010C1119），混勻血小板（如需獲得的富集血小板血漿則不需加入稀釋液，直接取血漿層即得）。

 

• 500g，離心 20min，離心后棄上清。

 

• 向含有血小板沉淀的離心管中加入 10ml 清洗液（產(chǎn)品編號：2010X1118）混勻，離心450g，15min，棄上清后以 0.5ml 后續(xù)實驗所需相應(yīng)液體重懸目的細胞。

方法二（需獲得血小板富集血漿的客戶請勿選擇此方法）：
 
1. 在 15ml 離心管中，先加入 4ml 分離液，再將分離液與樣本稀釋液 8：2 混合的液體 1ml

小心疊加于分離液之液面上形成梯度界面。
 

• 將抗凝血液樣本 2-3ml 小心加于分離液之液面上，400g，離心 20min。

 

• 離心后，環(huán)狀血小板層存在于血漿層中，取血小板層或血漿層（血小板層不明顯時）于另一 15ml 離心管中。

 

• 后續(xù)試驗同方法一中的步驟 5。

 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結(jié)果，最好在取血 2h 內(nèi)進行實驗，血液存放時間越長，細胞分離效果越差。血液放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導(dǎo)致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 吸取過多的血小板血漿層下層溶液會導(dǎo)致交界處單個核細胞混雜。

 

• 分離液用量大于血液樣本時，分離效果更佳。

 

• 如實驗后細胞得率或活性過低，請聯(lián)系技術(shù)支持以尋求幫助。

 
【儲存條件及有效期】
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟
 
封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。
 
【參考值（參考范圍）】
 
本實驗血小板提取率大于 80%。
 
下表為成年人外周血中各種細胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進行參考。
 

			紅細胞		白細胞		血小板
				（4.0-10.0）×109
	含量（個/L）		（4.0-5.5）×1012	中性粒細胞	淋巴細胞	單核細胞	（1.0-3.0）×1011
				50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相關(guān)實驗技術(shù)方案】
1.		所獲得血小板的酸提取技術(shù)。
2.		所獲得目的細胞的鑒定方法
		A.流式細胞技術(shù)