人子宮內膜淋巴細胞分離液實驗方法
 
本品用于分離人子宮內膜組織淋巴細胞
 
【產品規格】
 
2×200ml/Kit
 
【產品組成】
 
為方便廣大用戶使用，試劑內容如下：
 

	名稱	產品編號	規格
A	分離液 1		200ml
B	分離液 2		200ml
C	樣本稀釋液（贈品）	2010C1119	200ml
D	清洗液（贈品）	2010X1118	200ml
E	F 液（贈品）	F2013TBD	200ml
Ｆ	說明書		1 份

 
【實驗前準備】
 
適用儀器：最大離心力可達 1200g 的水平轉子離心機
 
【檢驗方法】
 
全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。
 

• 首先制備臟器組織單細胞懸液，制備方法詳見“組織單細胞懸液制備技術（文檔編號：

 
TBD0004SOP）”。
 

• 取一支離心管，依次小心加入分離液 1、分離液 2（體積比為 3:1，試劑總量與細胞懸液體積比為 2：1。如細胞懸液為 2ml，則先后加入分離液 1：3ml、分離液 2：1ml。試劑總量最少不低于 4ml。），制成梯度界面，各液面分層一定要清晰。

 

• 用吸管小心吸取細胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min（注：根據樣本量確定離心條件，血液樣本量越多，離心力越大，離心時間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達到最佳分離效果）。

 

• 離心后，此時離心管中由上至下分為六層。第一層為稀釋液層。第二層為環狀乳白色單核細胞層（第一層白環及上層 50%分離液 2）。第三層為環狀乳白色淋巴細胞層（下層50%分離液 2 及第二層白環）。第四層為透明分離液 1 液層。第五層為粒細胞層。第六層為紅細胞層。

 

• 用吸管小心吸取第二層到另一 15ml 離心管中，往所得離心管中加入 10ml 清洗液（產品

編號：2010X1118），混勻細胞。
 

• 250g，離心 10min。

 

• 棄上清。

 

• 用吸管以 5-10ml 清洗液（產品編號：2010X1118）重懸所得細胞。

 

• 250g，離心 10min。

 

• 重復 7、8、9，棄上清后以 0.5ml 后續實驗所需相應液體重懸細胞。

 
分離圖例
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
【注意事項】
 

• 全過程樣本、試劑及實驗環境均需在 20±2℃的條件下進行。為獲得最佳的實驗結果，最好在取樣 2h 內進行實驗，樣本存放時間越長，細胞分離效果越差。樣本放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達到分離目的。

 

• 本實驗最好不使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，應使用無靜電、低靜電離心管及未經堿處理過后的玻璃制品，因為靜電作用將導致細胞貼壁、堿處理的玻璃表面會變成毛面，影響細胞分離效果。

 

• 分離液用量大于臟器組織單細胞懸液樣本量時，分離效果更佳。

 
如實驗后細胞得率或活性過低，請聯系研謹生物支持以尋求幫助。
 
常溫保存，有效期 2 年。本品易感染細菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現白色結晶，影響分離效果。
【參考值（參考范圍）】